人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%丙酮酸钠+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

贴壁传代方法：首次建议1:2传代。传代后2天更换培养液。

备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，请将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。

收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，随后放置于超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。

在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（最好拍摄40x、100x、200x三个倍数的照片）。前三天的照片将是重要的售后依据，如果不提供照片将默认收到的状态良好。

（传代后，建议使用原瓶的完全培养基进行一瓶的培养，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖稍松。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基置于37℃、5%CO2孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（分为两个T25瓶），再补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞完全回缩后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞以使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续要转移至液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上后再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2培养箱中培养。
4. 第二天，使用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会出现细胞脱落的情况，这属正常现象。如脱落细胞较多，可以将培养瓶的培养液全部收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加5ml完全培养基终止反应。然后再离心、弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

若细胞出现下列问题，可申请重发：

1. 在运输过程中遭遇的各类问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发。
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实的实验结果，确认后可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后或干冰发货的细胞复苏后24小时内，若绝大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 干冰发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞在静置4小时后且未开封出现污染情况，亦可申请重发。
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供有效实验结果，用台盼蓝染色法检测细胞活力；核实后予以重发。
6. 核实收到细胞当天以及第2、第3天的照片，如果3天内未告知，视为产品符合标准。若在4-7天内问题发生，需要提供前三天的照片和详细操作记录，并与技术人员沟通，由技术人员判断责任，予以重发。

2）不予重发的情况

如遇以下情况，将不予重发：

1. 因客户自身原因导致的细胞污染。
2. 不当操作导致细胞状态不佳。
3. 使用非本库推荐的培养体系，造成细胞状态不佳。
4. 细胞状态不佳而未提供前三天的照片。
5. 细胞在培养过程中经其它处理。
6. 收到细胞后2天内未及时告知问题。
7. 依据具体情况处理。

在选择人胰腺癌细胞HPAFⅡ作为研究细胞的同时，选择人生就是博-尊龙凯时的产品，可以确保您的细胞培养过程更加顺利与高效。