研究人员已经揭示，CRISPR/Cas9的脱靶效应通常依赖于sgRNA。除了可以精确编辑靶位点外，sgRNA对5到6个碱基的错配具有一定的容忍度。此外，sgRNA在缺少或多出某些碱基的情况下可能导致非靶向切割，从而引发脱靶现象。这样的潜在脱靶位点在基因组中无数存在，因此全面评估全基因组范围内的脱靶效应，成为科学研究中的一大挑战。

近年来，借助全基因组测序和生物信息学预测的新技术，可以实时分析由于脱靶效应产生的单核苷酸突变（SNV）、插入缺失变异（Indels）、拷贝数变异（CNV）及结构变异（SV）。例如，Kevin等人（2021年）通过全基因组测序和生物信息分析，评估了Cas9的脱靶风险。他们对163个sgRNA在基因编辑小鼠与对照小鼠中进行基因组序列和结构变异的对比，借助Cas-OFFinder预测163个sgRNA在基因组中的556,266个潜在脱靶位点，并通过变异信息与潜在脱靶位点交集分析，成功识别出28个脱靶位点，其中9个经过Sanger测序验证为真实脱靶位点。这项研究显示，尽管真实脱靶的比例很小，但潜在风险仍不容忽视。

基于基因编辑的脱靶特性，舒桐研发团队结合基因组测序，推出了先进的全基因组脱靶检测服务。我们利用mutect2工具进行变异分析，通过比较基因编辑组和对照组的测序数据，识别出基因编辑组中的SNV和Indels变异。同时，使用Cas-OFFinder进行潜在脱靶位点的预测，分析sgRNA与基因组的匹配情况。通过将mutect2的变异分析结果与Cas-OFFinder预测的潜在脱靶位点交集，可以得出确切的脱靶位点数据，为科学研究提供更高的准确性。

除了脱靶效应分析，我们还使用CNVkit和Manta这两款生物信息分析工具进行全面检测。CNVkit可以识别基因组中的拷贝数变化，而Manta则专注于插入、缺失及易位等染色体结构变异类型。这些分析结果有助于深入理解基因编辑所造成的染色体结构变化。

与GUIDE-seq体内检测方法相比，全基因组脱靶检测不依赖于ODN的插入，提供了更为灵活和便捷的检测方式。此外，该方法可以分析染色体大片段的变异，帮助用户全面评估基因编辑的效果和潜在风险。作为国内首家提供脱靶检测服务的公司，人生就是博-尊龙凯时为您提供多种服务，包括全基因组脱靶检测、GUIDE-seq体内脱靶检测以及AID-seq体内脱靶检测。如果您需要进一步的信息，欢迎随时与我们联系。