产品简介

衍生化技术的主要目的是提升目标生物分子的可检测性，从而增强检测器对此类物质的响应。在弱碱性环境下，OPA和3-MPA能够与氨基酸的羰基和氨基发生反应，形成衍生物，并在紫外光的激发下发射出较长波长的光，这种现象称为荧光。衍生物的荧光强度与其浓度呈正比，因此可以通过测量荧光强度来计算样品中氨基酸的含量。这种方法具有快速、准确、高灵敏度及广泛适用性的优势，非常适合生物医学研究领域的应用。

产品信息:

货号: SDK1010
名称: 氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）
规格: 25T/50T
储存条件: 2-8℃

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实验步骤

1. 流动相A的配制：取适量的超纯水分别在瓶内溶解流动相A1、A2和A3。将溶解后的流动相A1、A2和A3移至1L容量瓶中，并用超纯水冲洗瓶壁1-2次，确保试剂充分溶解。最后，用超纯水将容量瓶定容至1L，混匀后过022μm有机相膜待用。

2. 流动相B的配制：将适量的超纯水在瓶内溶解流动相B，移至1L容量瓶中，冲洗瓶壁1-2次，加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈。最后，用超纯水定容至1L，混匀后过022μm有机相膜待用。

3. 将配制好的流动相A和B超声处理30分钟，排除溶剂中的气体，以防止色谱柱堵塞，影响实验结果。

4. 标准溶液的配制（用户需自备标准品）：取一定量的氨基酸标准品，用0.1MHCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，过022μm水相膜。

5. 衍生试剂的配制：取60mg试剂一，加入0.5mL试剂二、45mL试剂三和50μL试剂四，避光搅拌均匀后待用。根据具体需求，可相应调整配制量，通常可获得约5mL的衍生化试剂，进行25次手动衍生。

6. 开启电脑、打开液相色谱仪并启动各模块（使用FLD检测器），安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%）。在软件的方案组中设置柱温为35℃，流速为1mL/min，激发波长（λex）为340nm，发射波长（λem）为450nm，洗脱程序根据需求设置，运行时间为60分钟，保存方案。

7. 在进样前，用初始流动相（流动相A：流动相B=90:10）平衡色谱柱，时间为30分钟或更长，直至基线稳定后准备进样。

8. 实施自动衍生（进样程序的设定）：吸取氨基酸标准溶液1μL与2μL的衍生试剂，搅拌混合5次，等待1分钟后进样。

9. 若色谱仪无自动衍生功能，则可选择手动衍生：吸取100μL氨基酸标准溶液，加入200μL衍生试剂和200μL试剂三，混合后静置1分钟并通过022μm有机相膜，进行上样。

10. 进行实验需同时设置空白对照，使用等量0.1MHCl重复上述步骤，以排除潜在干扰。

检测结果示例

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